三七叶提取物对大鼠脑缺血模型的影响

提　要　目的:观察三七叶提取物对大鼠大脑中动脉缺血模型的影响。方法:通过栓线法造成大脑中动脉缺血,观察三七叶提取物对缺血大鼠的行为状态、脑缺血面积、脑组织形态学的作用。结果:三七叶提取物42.0、21.0、10.5mg/ kg 能明显改善大鼠脑缺血后的行为状态,缩小缺血范围,降低缺血程度,使病变的脑组织得到明显的改善。
关键词　三七叶提取物;总皂苷;总黄酮;脑缺血

1 材料
1.1 试验药物　三七叶提取物,深棕色粉末,其中总皂苷含量74.9 %,总黄酮3.92%,由本院新药中心剂型室提供,批号010616,成品规格0. 32g/ 粒。血塞通胶囊,云南白药集团文山七花有限公司生产,批号20020701。
1.2 动物　Wistar 大鼠体重240-290g,雄性,购自长春高新医学动物实验研究中心,合格证号:1025112 。
1.3 仪器 CIMA2400 医学图像分析仪,由四川大学生产。
1.4 方法 取直径0.3mm 尼龙鱼线,长约30mm ,一端加热成球形,距球面22mm 处作标记,以酒精清洗后置无菌生理盐水中备用。大鼠60只,随机分为6组,给药或同体积的蒸馏水每天1次,连续6天,给药第五天,以10%水合氯醛于大鼠腹腔注射3ml/kg麻醉。麻醉后大鼠仰卧手术台上,颈正中切口,分离右侧颈总动脉(CCA)、颈外动脉(ECA)、颈内动脉(ICA),结扎ECA及其分支,于CCA分叉处剪一小口,由此处轻轻插入准备好的鱼线,平均深度为22.0±2.0mm。鱼线从CCA插入经ICA分叉轻轻进入颅内至大脑前动脉(ACA),其深度恰好阻断大脑中动脉血流,固定鱼线,缝合颈部皮肤，4，8，24小时观察神经症状。假手术组除不插入鱼线外其余操作步骤同上。动物清醒后,于手术当天末次给药,根据Zea Longa 方法进行评分:0 分,无神经损伤症状;1 分,不能完全伸展对侧前爪;2 分,向外侧转圈;3分,向对侧倾倒;4 分,不能自发行走,意识丧失[1]。
　　上述造模动物末次给药后1小时,即脑缺血24小时后处死, 采用红四氮唑（TTC）染色方法，将脑去除嗅球，小脑，脑干，平均冠状切片，四刀共五片，迅速放入TTC染色液中染色。37℃避光孵育20min，缺血部分不着色，不缺血部分呈玫瑰红。对TTC 染色的脑组织大体切片摄像后,用CIMA2400 医学图像分析系统测量缺血部分面积占整个脑组织切片的面积,计算缺血部分的百分比。
　　另取大鼠60只,同法分组、给药、造模,末次药后1小时,即脑缺血24 小时后,处死,立即取脑,将标本用10 %中性甲醛固定16小时,脱水、常规石蜡包埋、切片、HE染色,光镜检查,观察组织形态学变化。
2 结果
2.1 对阻断大脑中动脉所致局灶性脑缺血大鼠行为状态和缺血面积的影响
　　大鼠造模后24小时内出现不同程度的神经损伤症状,将大鼠尾提起,瘫痪侧前肢回收屈曲腹下(正常侧前肢向地面伸展) ,或行走时向一侧转圈等。由表1 结果可见,给药组症状均好于模型组。动物脑缺血后,脑缺血面积模型组与对照组比有非常显著的差异。
2.2 对阻断大脑中动脉所致局灶性脑缺血大鼠组织形态学的影响　
病理结果表明,空白对照组动物脑组织结构正常,未见异常改变。缺血模型组镜下可见缺血坏死区,坏死部分脑组织结构疏松,神经元只留有轮廓,或胞体为三角形,胞质嗜伊红明显增强,胞核固缩、溶解或消失。血塞通胶囊组多数动物脑组织看不到明显脑缺血区,皮质神经元与胶质细胞分布无异常,少数散在的神经元呈变性坏死改变。三七叶提取物高剂量脑组织看不到明显脑缺血区,脑皮质神经元与胶质细胞分布无异常,绝大多数神经元胞体呈椭圆形,胞核圆形,核仁清晰,胞浆无明显嗜伊红改变,但有少数散在神经元变性坏死;三七叶提取物中剂量大部分脑组织脑缺血区很小,有少数散在的神经元呈变性坏死改变。低剂量可见脑缺血坏死区,坏死区神经元呈变性坏死改变。
3 讨论
　　大脑中动脉为血栓常发部位,缺血性脑血管病多发生在大脑中动脉,因此,逆转或改善脑缺血后的诸多变化是药物治疗的主要目标。模拟人局灶性脑缺血动物模型最好通过阻断MCA 而复制[ 2 ,3 ] 。本模型保留有大脑中动脉,可进行血管观察,较接近于临床,该模型的另一特点是可以利用TTC 染色技术直观地观察脑梗塞程度。由于大鼠脑血管的解剖与人类相似,所以我们采用阻断大鼠一侧大脑中动脉来评价三七叶提取物的作用。结果表明,大脑中动脉阻断可造成大鼠脑运动区、感觉区皮层和基底神经节等部位的缺血、功能丧失,出现相应的神经病学症状和病理组织学改变。本研究结果显示,三七叶提取物可明显减轻局灶性脑缺血模型大鼠神经病学症状,缩小缺血面积,抑制神经细胞的病理学改变,表明三七叶提取物对局灶性脑缺血性脑损伤具有明显的保护作用,这为其临床上用于脑血栓的治疗提供了药理基础。
参考文献
1 何秋，等。栓线法制备大鼠局灶性脑缺血再灌注模型的研究，中国中医科大学学报，1998；27（4）：343
2 卞慧敏,等。通脉益智胶囊对大脑中动脉阻断模型的保护作用. 中药药理与临床,2001;17(5)∶36
3 贾士奇,等。脑血宁口服液对大鼠局造性脑缺血的保护作用。中国药学杂志,1999;34(12)∶808